发布日期：2020-02-19

主要内容：体内RNA抑制在疾病建模和治疗方面具有巨大潜力。尽管出现了由CRISPR / Cas9介导的永久敲除靶标基因的新方法，但当不适合对基因组DNA进行永久修饰时，针对RNA进行破坏的策略在治疗后天性代谢紊乱方面有利，而在致病性DNA时则可治疗RNA病毒感染疾病不可用（例如SARS-Cov-2和MERS感染）。最近，已经证明，靶向RNA的CRISPR效应子Cas13d可以在体外实现哺乳动物细胞中细胞RNA的强烈下调。在各种Cas13d亚型中，CasRx（RfxCas13d）在HEK293T细胞中显示出最有效的RNA抑制效率。但是，Cas13d的RNA靶向活性仍需要在体内进行验证。在这项研究中，CasRx系统被证明可以有效和功能性地抑制小鼠肝细胞中与代谢功能相关的基因，包括Pten，Pcsk9和lncLstr。 sgRNA阵列还实现了CasRx介导的多个基因的同时敲除，为调节复杂的代谢网络提供了有用的策略。此外，AAV（腺相关病毒）介导的CasRx和Pcsk9 sgRNAs传递至小鼠肝脏成功降低了血清PCSK9，导致血清胆固醇水平显着降低。重要的是，CasRx介导的Pcsk9的敲低是可逆的，并且Pcsk9可以反复下调，从而提供了可逆地调节代谢基因的有效策略。本工作提供了一项成功的概念验证试验，该试验提出了针对肝脏中设计的代谢调节的目标代谢基因的有效和调控性抑制。

文章链接：https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.02.17.945014v1